1. 简介

• Nextflow 是一款基于数据流（dataflow）的生物信息编程框架
  • 简化在不同计算平台（本地、集群、云端）编写并行计算流程
  • 支持多种编程语言
  • 支持多种容器技术
• nf-core 是社区维护的高质量 Nextflow 流程的集合
• 在运行时，使用nextflow调用如nf-core/rnaseq等流程，可实现一行命令运行所有上游分析

2. 安装

mamba create -n java-env openjdk=17 -y 

Nextflow 可以通过以下命令安装：

curl -s https://get.nextflow.io | bash 

这个命令会将 nextflow 的可执行文件下载到当前文件夹，然后可以将其移动到 PATH 路径中，如：

mv nextflow ~/bin/ 

安装完成后，可以使用 nextflow -v 检查是否安装成功。

3. 使用

3.1 查找需要运行的流程

在Pipelines上可查看nf-core发布的所有流程

点击可查看该流程包含的步骤、配置和参数

后文均以RNA-seq流程为例

3.2 编写samplesheet.csv

在Usage页面可查看samplesheet.csv的格式，如

sample,fastq_1,fastq_2,strandedness
CONTROL_REP1,AEG588A1_S1_L002_R1_001.fastq.gz,AEG588A1_S1_L002_R2_001.fastq.gz,auto
CONTROL_REP1,AEG588A1_S1_L003_R1_001.fastq.gz,AEG588A1_S1_L003_R2_001.fastq.gz,auto
CONTROL_REP1,AEG588A1_S1_L004_R1_001.fastq.gz,AEG588A1_S1_L004_R2_001.fastq.gz,auto

3.3 准备GTF与FASTA

建议使用Refgenie来管理参考基因组，参见refgenie：让基因组参考序列管理更简单高效
也可手动下载

3.4 编写自定义配置文件nf.config（可选）

一般来说，nf-core的默认配置文件可以满足我们的需求。若有额外的自定义需求，可以编写nf.config来完成。

workDir = "data/101.RNA_workflow/work"

process {    
    // 全局资源限制
    resourceLimits = [ cpus: 50, memory: 400.GB]
}
executor {
	// 'local' is default executor
    name         = 'local'
}
params {
    // Default Resources
    max_memory                 = 400.GB
    max_cpus                   = 50
}

此处将nextflow运行时产生的临时文件的目录设置为data/101.RNA_workflow/work，将所有任务的最大资源限制设置为cpus: 50, memory: 400.GB，将运行方法设置为local，即只在当前节点运行流程。
若希望同时使用多个节点运行流程，参考下方的“使用Slurm调度作业”。

3.5 运行Nextflow

建议在Screen或tmux等终端复用器上运行此脚本，以防止断开终端造成的流程中断。

#!/bin/bash
nextflow run nf-core/rnaseq \
    --input data/01.RawData/samplesheet.csv \
    --outdir data/101.RNA_workflow \
    --gtf data/reference_data/alias/mm10/gencode_gtf/default/mm10.gtf.gz \
    --fasta data/reference_data/alias/mm10/fasta/default/mm10.fa \
    --featurecounts_group_type gene_type \
    --save_reference \
    -profile docker \
    -resume \
    -c ./nf.config

参数解释：

• nextflow run nf-core/rnaseq: 运行名为 nf-core/rnaseq 的 Nextflow 流程。
• --input data/01.RawData/samplesheet.csv: 指定输入文件为 data/01.RawData/samplesheet.csv，该文件包含了样本信息。
• --outdir data/101.RNA_workflow: 指定输出目录为 data/101.RNA_workflow。
• --gtf data/reference_data/alias/mm10/gencode_gtf/default/mm10.gtf.gz: 指定基因注释文件 (GTF) 的路径。
• --fasta data/reference_data/alias/mm10/fasta/default/mm10.fa: 指定基因组序列文件 (FASTA) 的路径。
• --featurecounts_group_type gene_type: 指定 featureCounts 的 group-type 参数为 gene_type。
  • 若使用gencode的GTF，则此项为gene_type；若使用ensembl的GTF，则此项为gene_biotype.
• --save_reference: 保存生成的index，这样重复运行流程时，会使用上次生成的index.
• -profile docker: 使用 Docker 运行流程。
  • 对于本服务器，可选的引擎为docker或conda，但推荐使用docker.
• -resume: 断点续跑，继续之前未完成的任务。
• -c ./nf.config: 指定 Nextflow 的自定义配置文件为 ./nf.config（如果有的话）。

3.6 Debug

若运行时遇到错误，可查看

1. 命令行最后输出的错误信息
2. 日志文件.nextflow.log，一般在运行命令时所在的目录
   • 多次运行流程时，nextflow会产生多个日志。.nextflow.log为最近一次运行的日志，.nextflow.log.1为上上次运行的日志，以此类推，最多可保存最近10次运行的日志。

若遇到困难，可在官方社群的Slack上进行提问。响应很快，一般一天之内就有回复。

4. 其他

4.1 解决GitHub连接失败的问题

在GitHub连接失败的情况下，一般需要修改两个地方来解决问题。

1. 修改~/.nextflow/assets/local/rnaseq/nextflow.config中

    custom_config_base         = "https://github.com/nf-core/configs/${params.custom_config_version}"

为

    custom_config_base         = "https://fastly.jsdelivr.net/gh/nf-core/configs@${params.custom_config_version}"

2. 将运行的流程clone到本地

git clone https://gitclone.com/github.com/nf-core/rnaseq.git tools/

而后修改脚本中的命令为

nextflow run file:/data0/work/guozhonghao/HCC/tools/rnaseq.git \

此处似乎只能用绝对路径，请修改上面路径为你的项目的路径。

4.2 使用Slurm调度作业

由于Slurm调度作业时需要耗费一定的时间，因此小样本量使用Slurm运行流程可能反而不如在单节点上快。因此建议只在**单节点的算力明显不足时（如样本量>50-100）**使用Slurm.

4.2.1 （管理员）升级Slurm和系统配置Slurm（建议）

Slurm默认的资源选择是以节点为粒度的资源分配（select/linear），在节点中如果作业申请资源不能全部占满全部核心，就会出现资源超额分配的问题。也就是在实际运行中，一个节点只能同时运行一项任务，无法做到一个节点同时运行多项任务。

独占模式调度策略的优势在于，作业可以获得所分配节点的全部资源，从而实现最佳的并行性能。其缺点是，作业可能会占用大量其自身并不使用的资源，而这些资源也无法与其他作业共享。

Slurm在19.05的版本中，增加了_cons_tres_ Select 插件，可以做到将单个的CPU核、内存、GPU及其它可追踪资源作为可消费资源（消费及分配）。也就是可以根据每项任务所需求的CPU核、内存、GPU数量，将其填充到节点中，做到一个节点中同时运行多个任务，最大化利用资源。

消耗型资源调度策略的优势在于可以显著提升作业吞吐量。集群的整体作业吞吐量和生产力得以提高，从而减少用户等待作业完成的时间，并提升集群的整体使用效率。其缺点是，默认情况下，用户无法独占整个节点来运行其作业。

目前服务器上Slurm版本为18.08.8，没有_cons_tres_ Select 插件，需要升级到新版本。（目前有_cons_res_ Select插件，但只能将单个的CPU核和内存作为可消费资源，无法细致管理GPU，并且不支持_cons_tres_的许多功能）

升级教程

参考

• 升级slurm，从18.08到23.02 - 花花今天没吃药 - 博客园
• Slurm Workload Manager - Upgrade Guide
  注意升级时不能一次超过两个大版本，因此需要逐步升级。如上面教程的策略是18.08->20.02->21.08->23.02

修改slurm.conf

修改SelectType=SELECT/LINEAR为

SelectType=select/cons_tres
SelectTypeParameters=CR_Core_Memory

（可选但建议）增加DefMemPerCPU，即默认为每个线程配备的内存量，防止memory oversubscription

# Based on 256GB nodes
# 256GB * 0.95 = 243GB usable 
# 243GB * 1024 / 64 ≈ 3,888MB
DefMemPerCPU=3888

详细解释：

• Slurm Workload Manager - Consumable Resources in Slurm
• Slurm Workload Manager - Sharing Consumable Resources

4.2.2 （用户）在nf.config中配置使用Slurm运行

将nf.config的executor项修改为

executor {
    name         = 'slurm'
    queueSize    = 100
    pollInterval = '10 sec'
    clusterOptions = "--partition=compute,xu-gpu --exclude='xu_cu21,xu_cu23,xu_cu25'"
}

参数解释

• name = 'slurm': 指定执行器的名称为 slurm.
• queueSize = 100': 设置提交给 Slurm 调度器的最大作业队列大小为 100。这意味着 Nextflow 一次最多会向 Slurm 提交 100 个作业。如果流程中的任务数量超过 100，Nextflow 会等待直到有作业完成，才会继续提交新的作业。这样可以避免一次性向 Slurm 提交过多作业，导致调度器负载过高。
• pollInterval = '10 sec': 设置轮询 Slurm 调度器以获取作业状态更新的时间间隔为 10 秒。Nextflow 会每隔 10 秒查询一次 Slurm，检查已提交作业的状态（例如，运行中、已完成、失败等）。
• clusterOptions = "--partition=compute,xu-gpu --exclude='xu_cu21,xu_cu23,xu_cu25'": 设置传递给 Slurm 的额外选项。这些选项会在 Nextflow 通过 sbatch 提交作业时添加到命令行中。
  • --partition=compute,xu-gpu: 指定作业提交到名为 compute 和 xu-gpu 的分区。
  • --exclude='xu_cu21,xu_cu23,xu_cu25': 排除名为 xu_cu21、xu_cu23 和 xu_cu25 的节点。这些节点将不会被 Slurm 用于运行作业。